7.0.    PROCEDIMIENTO

Todo el procedimiento se debe realizar en la campana de bioseguridad.

a)      Microscopia: examen directo con KOH: en un portaobjetos colocar una pequeña cantidad de muestra y adicionar una gota de KOH, colocar un cubreobjetos, calentar suavemente y presionar para eliminar el exceso. Observar al microscopio

b)      Cultivo: colocar una pequeña cantidad de muestra en la superficie del medio de sabouraud e incubar a 27° C durante 5 semanas .Si no hay crecimiento reportar como negativo.

      Si hay crecimiento realizar:

·     Examen macroscópico de la colonia anotando sus características

·     Examen directo con cinta adhesiva

·     Microcultivo  

c) Examen macroscópico de la colonia: color, aspecto (liso, rugoso, lanoso, algodonoso, cerebriforme, polvoriento, etc.), consistencia (blanda, dura, mucoide), relieve, tamaño, producción de pigmento y velocidad de crecimiento.

d) Examen directo con cinta adhesiva:

·     Esterilizar a la flama el asa micológica y dejar enfriar

·     Pegar la cinta adhesiva transparente al asa

·     Introducir el asa con la cinta en el tubo o caja petri hasta tocar la colonia con la parte  adhesiva de la cinta

·     Con la ayuda de una aguja de disección, colocar sobre el portaobjetos la cinta adhesiva sobre el cual previamente se ha colocado una gota de azul de algodón. Observar al microscopio a seco débil y seco fuerte buscando las estructuras características del microorganismo para su identificación como son el tipo de micelio, la forma de las estructuras de reproducción sexual, entre otras.

 

 

e) Microcultivos:

·     Cortar pequeños cuadros de 1 x 1 cm de agar Sauboraud

·     Colocar el cuadro de agar sobre un portaobjetos con un asa en forma de L, remover una pequeña porción de la colonia e inocular los cuatro lados del agar.

·     Colocar un cubreobjetos sobre el agar inoculado

·     En la caja de petri, colocar un disco de papel filtro saturado con agua. Colocar encima una varilla en forma de U

·     Sobre la varilla colocar el portaobjetos y cerrar la caja

·     Incubar a 28° C y examinar el cultivo diariamente hasta determinar que la colonia ha madurado y se han desarrollado sus estructuras

·     Con la ayuda de unas pinzas, separar el cubreobjetos del agar, colocarlo sobre un portaobjetos al cual previamente se le ha colocado una gota de azul de algodón y observar al microscopio.